TÉCNICA IMUNOBlot
Fácil manuseio, avaliação confiável e simples.
É um imunoensaio em suporte sólido que utiliza antígenos imobilizados para detectar anticorpos contra proteínas específicas.
Os antígenos utilizados são altamente puros e geralmente isolados por afinidade cromatográfica. As tiras de membrana não contêm proteínas desnecessárias que podem causar resultados falsos positivos.
As faixas de antígenos são colocadas em posições muito bem definidas, o que significa que a avaliação dos testes é muito mais simples do que por Westernblots.
As bandas resultantes são transferidas para uma membrana de nitrocelulose que é cortada em tiras.
Princípio do Teste:
- Membranas cobertas com finas tiras paralelas que contêm antígenos puros são usadas como fase sólida. As membranas são fixadas sobre uma lâmina sintética.
- Se a amostra for positiva, anticorpos específicos diluídos na amostra de soro se ligam aos antígenos da fase sólida.
- Em um segundo período de incubação, os anticorpos ligados reagem com autoanticorpos marcados com fosfatase alcalina.
- Em uma terceira etapa, os anticorpos recebem coloração de uma solução de cromogênio, que é capaz de promover uma reação de cor. Uma faixa bastante escura na linha dos antígenos correspondentes aparece se a amostra de soro contém anticorpos específicos. Dependendo do espectro de antígenos que foi utilizado, é possível analisar diversos anticorpos próximos um do outro simultaneamente, dentro das mesmas condições.
Vantagens
- Uma tira de membrana separada é incubada para cada amostra de soro.
- Tempo total de duração da análise é de aproximadamente 1 hora e 45 minutos.
- A incubação pode ser automatizada com o uso do EUROBlotMaster.
- Todos os processos de incubação acontecem em temperatura ambiente.
- A conclusão das etapas de incubação individual é indicada pelas marcações no controle de faixas em cada tira de teste EUROLINE.
- Resultados positivos e negativos podem ser diferenciados uns dos outros de forma rápida e confiável. A intensidade das faixas de antígenos está relacionada à titulação do anticorpo.
- As tiras de teste EUROLINE incubadas podem ser armazenadas por longos períodos.
- Resultados podem ser documentados com facilidade.
- O programa EUROLineScan, da EUROIMMUN foi desenvolvido para permitir avaliação quantitativa das tiras de teste EUROLINE e facilitar o gerenciamento de dados e fornecer documentação detalhada dos resultados. Primeiramente, as tiras de teste EUROLINE incubadas são escaneadas. EUROLineScan reconhece a posição das tiras mesmo que elas não tenham sido colocadas com precisão; identifica as tiras e mede sua intensidade. Os estudos são gravados juntos aos dados da imagem e o resultado individual pode ser produzido para cada paciente.